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    1. 產品列表PRODUCTS LIST

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      樣本保存液(帶證,滅活型)

      簡要描述:

      樣本保存液(帶證,滅活型)公司正在出售的產品:大鼠肺動脈內皮細胞 葡萄糖苷2β/Glucosidase IIβ封閉多肽 金氏金氏菌PCR檢測試劑盒 大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISA Kit αL阿拉伯呋喃糖苷(αLAf)比色法檢測試劑盒 球蓋蟻巢傘 FXYD離子轉運調節因子7抗體

      更新時間:2024-01-15

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      樣本保存液(帶證,滅活型)

      公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

      貨號

      產品名稱

      規格

      A-Tq3126

      樣本保存液(帶證,滅活型)

      3ml/管,10/

      A-Tq3126

      樣本保存液(帶證,滅活型)

      3ml/管,50/

      A-Tq3126

      樣本保存液(帶證,滅活型)

      6ml/管,10/

      A-Tq3126

      樣本保存液(帶證,滅活型)

      6ml/管,50/

      QQ截圖20240110094643.jpg


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      PCR基本步驟及注意事項?

      一、實驗原理

      PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子,進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。

      在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節循環次數,在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。

      二、主要的成分

      1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

      注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

      2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止濃度過大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

      PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

      沒有ct值

      檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

      1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);

      2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

      3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

      4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

      5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

      ct值過晚

      在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。

      因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。

      1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

      2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

      3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

      4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

      5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

      公司正在出售的產品:

      腦膜炎黃桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

      C1q/TNF相關蛋白3ELISA試劑盒 Cartonectin/CTRP3/CORS-26免費代測試劑

      玉米源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

      尼氏單孢子蟲PCR檢測試劑盒供應

      泛蛋白連接E3成分N-識別蛋白4ELISA試劑盒 UBR4免費代測試劑

      小反芻獸疫病毒PCR檢測試劑盒供應

      伽氏疏螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒

      多巴胺受體D5ELISA試劑盒

      庫蚊通用探針法熒光定量PCR試劑盒

      腺病毒PCR檢測試劑盒

      芳基硫酯HELISA試劑盒

      口蹄疫病毒C亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

      牛蒡子探針法PCR鑒定試劑盒

      分揀連接蛋白14ELISA試劑盒

      人乳頭瘤病毒52探針法熒光定量PCR試劑盒

      腦膜炎奈瑟菌C群染料法熒光定量PCR試劑盒

      封閉蛋白16ELISA試劑盒

      歐洲放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒

      腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒

      鈣蛋白12ELISA試劑盒

      人類白細胞抗原AHLA-A)基因染料法熒光定量PCR試劑盒

      牛棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

      鈣黏蛋白7ELISA試劑盒

      焦檳榔染料法PCR鑒定試劑盒

      牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)核檢測試劑盒(RT-PCR

      甘露聚糖結合凝集絲氨肽1ELISA試劑盒

      人鼻病毒9 探針法熒光定量PCR試劑盒

      腦心肌炎病毒PCR檢測試劑盒

      干擾調節因子1ELISA試劑盒

      狂犬病病毒固定毒株PCR檢測試劑盒

      梅毒螺旋體核檢測試劑盒

      α淀粉(AMY1)試劑盒ELISA

      人基質金屬蛋白基因PCR檢測試劑盒

      馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒

      相關抗原(Ⅷ-Ag)elisa試劑盒

      紫花地丁染料法PCR鑒定試劑盒

      著色霉探針法熒光定量PCR試劑盒

      樣本保存液(帶證,滅活型)G蛋白偶聯受體152(GPR152/PGR5)ELISA檢測試劑盒

      馬鏈球菌馬亞種PCR檢測試劑盒

      脫氮副球菌PCR檢測試劑盒

      人丙型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA試劑盒

      豬瘟病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

      人鼻病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

      人泛結合E2D1UBC4/ 5的同源物,酵母)(UBE2D1)ELISA試劑盒

      人皰疹病毒通用PCR檢測試劑盒

       


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