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      乙基丙二酸腦病變基因1試劑盒說明書

      點擊次數:54 發布時間:2024/3/6
      提 供 商: 上海撫生實業有限公司 資料大?。?/td>
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                 乙基丙二酸腦病變基因1試劑盒說明書                                             

      實驗原理:

      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化的血清素/血清胺(ST)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST),再與HRP標記的血清素/血清胺(ST)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶S的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清素/血清胺(ST)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中血清素/血清胺(ST)濃度。

      試劑盒特點:

      1、高效、靈敏、特異的抗體;

      2、穩定的重復性和可靠性;

      3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

      4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型;

      5、節省實驗經費。

      試劑盒組成 :

      1、30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶

      2、酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(160pg/ml) 0.5ml×1瓶

      3、酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶

      4、樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份

      5、顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張  

      6、顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

      標本要求: 

      1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

      2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

      樣本處理及要求:
      1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
      3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
      4.  細胞培養物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

      操作步驟

      1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

      80pg/ml

      5號標準品

      150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

      40pg/ml

      4號標準品

      150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

      20pg/ml

      3號標準品

      150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

      10pg/ml

      2號標準品

      150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

      5pg/ml

      1號標準品

      150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

       

      2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

      4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7. 溫育:操作同3。

      8. 洗滌:操作同5。

      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

      11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

      操作程序總結:

      操作程序總結.png

       

      計算

        以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

      注意事項

      1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

      2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

      3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

      4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

      6.底物請避光保存。

      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

      9.本試劑不同批號組分不得混用。

       

       


       
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